植物总糖和还原糖检测试剂盒(DNS比色法)检测原理是还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系,在540nm处用分光光度计测定棕红色物质的吸光度,该吸光度值与还原糖含量呈线性关系,利用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。
价格:¥15.00
规格:反应
货号:ST1545
品牌:LEAGENE
服务介绍:
植物总糖和还原糖检测试剂盒(DNS比色法)检测原理是还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系,在540nm处用分光光度计测定棕红色物质的吸光度,该吸光度值与还原糖含量呈线性关系,利用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。
货号 | 名称 | 规格 | 价格 |
ST1545 | 植物总糖和还原糖检测试剂盒 | 反应 | 15元 |
实验流程:
还原糖的提取:
①称取植物样品0.5~3g,剪碎,加入蒸馏水约3ml匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12ml蒸馏水冲洗研磨器2~3次,洗出液也转移至该容器。
②50℃水浴30min,并不时搅拌,以便还原糖彻底浸出。
③将沉淀和浸出液转移至50ml离心管,4000g离心5min。
④留取上清液,向沉淀中加入20ml蒸馏水,混匀,再次4000g离心5min。
⑤留取上清液,将2次获得的上清液合并,用蒸馏水定容至100ml(提取液),混匀,作为还原糖待测液。
总糖的水解和提取:
①称取植物样品0.5~3g,剪碎,加入蒸馏水约3ml匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12ml蒸馏水冲洗研磨器2~3次,洗出液也转移至该容器。
②向容器中加入10ml 6M盐酸溶液,搅拌均匀,煮沸30min,并不时搅拌。
③取2滴滴加于载玻片上,滴加1滴显色液(约50ul),检查水解是否完全,如已经水解完全,则不显示蓝色。
④水解完毕后,冷却至室温,加入6M氢氧化钠溶液,使溶液pH至7.4,用蒸馏水定容至100ml,混匀,4000g离心5min。
⑤取上清或滤液10ml,用蒸馏水定容至100ml,成稀释10倍的总糖水解液(提取液),取0.5ml总糖水解液,测定其还原糖的含量。
稀释葡萄糖标准:取干净离心管,按下表操作,依次获得系列浓度的Glu标准。
加入物质(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Glu标准(1mg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
蒸馏水 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
标准葡萄糖浓度(mg/ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
加样:取5ml离心管,按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡,小心混匀;如果样品中的糖浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2~3平行管,求平均值。
加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
蒸馏水 | 0.5 | - | - |
系列Glu标准(1~5号) | - | 0.5 | - |
提取液 | - | - | 0.5 |
DNS检测液 | 1 | 1 | 1 |
沸水浴中准确煮沸5min,取出,自来水冷却至室温。补加蒸馏水2.5ml。 |
还原糖测定:混匀,以空白管调零,比色杯光径1cm,分光光度计测定540nm处标准管、测定管的吸光度。
实验结果:全自动生化仪检测后导出结果,结果由EXCEL形式发送。
送样运输要求:
植物组织样本(干冰运输)
准确称取动物组织重量按重量(mg):体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水),冰水浴条件下,机械匀浆,制备成10%的匀浆液,2500~3000转/分钟,离心10分钟,取上清液进行测定。
仅供科研用途,不可用于临床诊断!