服务介绍：

BCA法测蛋白的原理是在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。BCA 法与传统方法相比，操作更简单、试剂及其形成的颜色复合物更稳定、灵敏度更高。BCA法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于5%以内的去垢剂如SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween80、NP-40具有很好的兼容性，但易受螯合剂、还原剂等的影响，在测定蛋白浓度前应尽量使样本满足如下要求：EDTA浓度≤10mM、DTT浓度≤1mM、2-ME≤0.01%、无EGTA。

实验流程：

1、 配制成20mg/ml的蛋白标准溶液。

2、 取适量的20mg/ml蛋白标准溶液，稀释至终浓度为500μg/ml。

3、 配制BCA工作液。

4、 将500μg/ml蛋白标准溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加稀释液补足至20μl，其蛋白标准浓度依次为0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。

5、 加20μl待测蛋白到96孔板或EP管中，如果样本不足20μl，用稀释液补足至20μl。

6、 向各孔或EP管加入200μl配制好的BCA工作液，迅速混匀，37℃孵育30～60min。

7、 冷却至室温，立即用酶标仪或分光光度计测定562nm波长处吸光度，各孔或EP管吸光度减去蛋白浓度为0μg/ml的标准管的吸光度，以求得的差值为纵坐标： 以标准孔或EP管中蛋白浓度(μg/ml)为横坐标，得出标准曲线及回归方程，根据标准曲线计算出待测样品的蛋白浓度。

实验结果：全自动生化仪检测后导出结果，结果由EXCEL形式发送。

送样运输要求：

1、动植物组织样本(干冰运输)

准确称取动物组织重量按重量(mg)：体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。

2、血清样本(干冰运输)

全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜（GLU检测请勿全血样本放置过夜取血清）后于2-8℃ 3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

3、血浆样本(干冰运输)

可用肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

4、细胞样本

贴壁细胞：将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

悬浮细胞：将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

细胞上清：标本于2-8℃，3000转/分离心15min取上清，上清立即用于实验，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！