服务介绍：

      自由基清除率检测试剂盒(比色法)又称氮自由基清除能力检测试剂盒或氮自由基清除率检测试剂盒，其检测原理是DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，含一个单电子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子与此单电子配对，溶液会褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比，通过吸光度下降的程度来反应样品的氮自由基清除能力，主要用于检测血清、植物组织、抗氧化类食品、保健品及药品等样本。

 实验流程：

1、准备样品：

①植物样品：取新鲜植物样本，清洗干净，研钵研碎(粉碎)，干燥箱烘干后过筛，称取0.05g样品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用(亦可参考相关资料提取方法提取)。

②血浆、血清和尿液样品：血浆(用肝素或枸橼酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝) 4℃ 5000rpm离心10min，取上清液待用；血清或尿液样品可直接测定。

③细胞样品：按每5×10⁶个细胞加入0.8ml氮自由基提取液，超声破碎(功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)，10000rpm离心10min，取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等样品：按样品：氮自由基提取液=1：9的比例震荡混匀，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用。

⑤    高活性样品：如果样品中有效浓度较高，可用提取液进行恰当的稀释。

   2、配制维生素C溶液：将一支10mg维生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中

   3、配制Vc标准工作液：如需测线性关系，建议用氮自由基提取液将10mg/ml维生素C溶液稀释至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc标准工作液

    4、 分光光度计开机预热30min，调节波长517nm(500~530nm亦可)，无水乙醇调零。

    5、DPPH加样：按照下表设置空白管、样本测定管、样本对照管、阳性对照管，溶液应按照顺序依次加入，混匀，室温避光静置30min。

6、 OD值测定：将各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度计检测各管吸光度值，依次记为A₀、A₁、A₂、A₃。

实验结果：

全自动生化仪检测后导出结果，结果由EXCEL形式发送。

送样运输要求：

1、动植物组织样本(干冰运输)

准确称取动物组织重量按重量(mg)：体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。

2、血清样本(干冰运输)

全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜（GLU检测请勿全血样本放置过夜取血清）后于2-8℃ 3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

3、血浆样本(干冰运输)

可用肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

4、细胞样本

贴壁细胞：将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

悬浮细胞：将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

细胞上清：标本于2-8℃，3000转/分离心15min取上清，上清立即用于实验，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！