服务介绍：

       植物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)(Plant MDA Assay Kit with TBA)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对植物组织(根、茎、叶、种子等)MDA进行检测，是专门用于植物脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测的试剂盒，不适用于动物组织、细胞、血液等；丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在532nm处有最大吸收，该复合物的吸光系数为155mmol/(L.cm)，并且在600nm波长处有最小吸收，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰，我们总结出经验公式，以消除这一干扰，亦可以通过比标准品进行比较，进行含量检测。

实验流程：

1、 样本处理：

①制备MDA提取液：取适量的植物根、茎、叶子、种子等，称量后剪碎，按每0.4g植物样品加入4ml的比例加入组织匀浆液，充分匀浆(一般取0.4～1g植物样品即可)。4000g离心10min，取上清液待用

②样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量植物样品的MDA含量；测定蛋白浓度非必须步骤，亦可采用经验公式计算。

2、配制TBA工作液：称取适量TBA，用组织匀浆液配制成浓度为0.68％的TBA工作液，例如取0.068g TBA用10ml组织匀浆液配制，最终浓度即为0.68%的TBA工作液。

3、稀释标准品：如果进行简易快速检测，标准品直接稀释至10μM；如果进行精确检测，取适量标准品用组织匀浆液稀释至1、2、5、10、20、50μM；

4、样品测定:

①分光光度计测定：在离心管或其它适当容器内加入1ml组织匀浆液作为空白对照，加入1ml MDA提取液用于测定，随后加入1ml TBA工作液。

 ②酶标仪测定：在离心管或其它适当容器内加入200μl组织匀浆液作为空白对照，加入200μlMDA提取液用于测定，随后加入200μl TBA工作液。可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：

③混匀, 加盖，95℃水浴煮沸30min，加热时务必注意避免液体暴沸溅出。

④冷水浴或流水冷却至室温，4000g离心10min。

⑤取上清，蒸馏水调零，用分光光度计或酶标仪测定532nm处吸光度，分别记为A_空白、A_标准、A_测定；

实验结果：

全自动生化仪检测后导出结果，结果由EXCEL形式发送。

送样运输要求：

1、动植物组织样本(干冰运输)

准确称取动物组织重量按重量(mg)：体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。

2、血清样本(干冰运输)

全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜（GLU检测请勿全血样本放置过夜取血清）后于2-8℃ 3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

3、血浆样本(干冰运输)

可用肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

4、细胞样本

贴壁细胞：将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

悬浮细胞：将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

细胞上清：标本于2-8℃，3000转/分离心15min取上清，上清立即用于实验，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！