服务介绍：

        多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚比色法)检测原理是以邻苯二酚作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计420nm处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算，主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的多酚氧化酶活性，尤其适用于检测水果中多酚氧化酶活性。

实验流程：

1、 准备样品：

①植物样品：取3g植物组织或水果中层果肉加入6ml预冷的PPO Lysis Buffer研磨或匀浆，4℃ 10000g离心15~20min，留取上清液。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以用于该试剂盒的测定

③细胞或组织样品：取恰当的细胞或组织裂解液，如有必要用PPO Lysis Buffer进行适当匀浆，4℃ 10000g离心15~20min，取上清液，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis Buffer进行恰当的稀释。

2、 PPO加样：按照下表设置对照管、测定管，注意：对照管、测定管中样品为同一待测样品，但对照管中为提前加热煮沸5min的样品；溶液应按照顺序依次加入，

       3、 PPO检测：以对照管为对照(调零)，比色杯光径1.0cm，立即分光光度计测定420nm处测定管的吸光度(记为A_测定0)；1min后立即测定420nm处测定管的吸光度(记为A_测定1)。Leagene建议加入PPO Assay buffer后立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1~2min内，其后反应趋于平缓。

注意：该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，因此加入PPO Assay buffer立即计时很重要，每次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。

实验结果：

全自动生化仪检测后导出结果，结果由EXCEL形式发送。

送样运输要求：

1、动植物组织样本(干冰运输)

准确称取动物组织重量按重量(mg)：体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。

2、血清样本(干冰运输)

全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜（GLU检测请勿全血样本放置过夜取血清）后于2-8℃ 3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

3、血浆样本(干冰运输)

可用肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

4、细胞样本

贴壁细胞：将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

悬浮细胞：将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

细胞上清：标本于2-8℃，3000转/分离心15min取上清，上清立即用于实验，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！