培养细胞中的细菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光学显微镜下可见,但支原体污染在光学显微镜下不可见,必须通过特定的检测方法进行检测。检测支原体污染的方法有很多种,包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、RT-PCR检测以及DNA荧光染色检测。上述检测方法中,除DNA荧光染色检测外操作步骤相对比较烦琐并且所需时间较长。
Leagene 支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是经典的利用DNA荧光染色法在培养细胞中原位染色检测支原体或其它原核生物的试剂盒,主要用于检测培养细胞中是否存在支原体污染。其原理是利用荧光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区域,因为支原体的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的蓝色荧光小点,即为支原体的DNA染色斑,说明有支原体污染。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm,最大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后,最大激发波长为352nm,最大发射波长为461nm。本试剂盒的荧光染色可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。