目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是:BCA法和Bradford法。
BCA法测蛋白的原理是在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nm处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。BCA 法与传统方法相比,操作更简单、试剂及其形成的颜色复合物更稳定、灵敏度更高。BCA法测定蛋白浓度兼容性亦很好,不受大部分样本中其他成分的影响,对于5%以内的去垢剂如SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween80、NP-40具有很好的兼容性,但易受螯合剂、还原剂等的影响,在测定蛋白浓度前应尽量使样本满足如下要求:EDTA浓度≤10mM、DTT浓度≤1mM、2-ME≤0.01%、无EGTA。
Leagene BCA Protein Assay Kit在50~2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定,其最小检出量为25μg/ml。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。