细胞核是一个功能单位,完整的保存了遗传物质,并指导RNA的合成。RNA是蛋白质及其他细胞组分合成所必须的。在大多数细胞类型中,由于核被膜与内质网的连续性以及细胞核表面与细胞骨架之间的连接等原因,细胞核是被固定于细胞中的。流式细胞术是一种快速、准确、高效的测定和分析细胞DNA含量的方法,近年来已广泛应用于植物研究中,如细胞周期分析、植物倍性鉴定、染色体分拣、细胞核DNA含量测定、生殖途径鉴定、DNA变异分析、遗传稳定性分析和体胚发生分析等。只通过物理方法即切碎叶片往往不能获取大量完整的细胞核,还需要加入一些特定成分的缓冲液,使植物细胞破损,分散细胞器,进而解离出细胞核,为后续的核DNA提取和DNA含量分析做准备。流式细胞术测定的生物细胞必须处于单细胞悬液状态,制备优质的细胞核悬液的关键在于选择合适的细胞核分离缓冲液。不同植物的组织结构和化学成分存在较大差异,使用细胞核分离缓冲液的效果不同,而且目前没有一种普遍适用的细胞核分离缓冲液,因此需要尝试不同的缓冲液,甚至改进其成分,以获得最佳的细胞核分离效果。
细胞核分离缓冲液(Nuclear Separation Buffer,NSB)又称细胞核隔离缓冲液(Nuclear Isolation Buffer,NIB),也称解离缓冲液(Dissociation Buffer),可以将细胞核跟细胞膜、内质网、细胞骨架等胞内成分分离开来。目前常用的解离液有Galbraith、Tris-MgCl2、HEPES、WPB、LB01、mGb、Marie、GPB、OTTO和Marie等,各种解离液成分和浓度各不相同,不同的植物样品需要选择相适应的解离液,Marie解离液主要由吐温、葡萄糖、氯化钾、氯化钠、EDTA、柠檬酸钠、HEPES、巯基乙醇等组,。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。