作者:小编更新时间:2024-07-26
冰晶的形成
图2 冷冻温度与时间的曲线对照图
细胞外冰晶和细胞内冰晶的形成从原理来解析,都是组织降温速度不够快,未能使组织快速达到玻璃态转化点以下形成玻璃态凝固。如果冷冻速度足够快,将大大减少形成冰晶,直接形成玻璃态凝固。。
秀威 冷冻包埋仪—超低温快速包埋系统
设备制冷:室温→ -50℃, 50-60分钟
样本制冷:根据不同标本需求,10-120秒
防止与减少冰晶的方法
取材
✔样本取材宜新鲜,尽量保持干燥
取材时组织样本保持干燥,不要接触水,必要时用PBS清洗。冷冻之前用滤纸或纱布吸去组织上多余的水分。样本尽量不要用液体浸泡,浸泡后,组织内水分会增加,容易造成冰冻后冰品形成。
✔样本组织的大小和厚度
组织的厚度决定着速冻的时间,如果太厚,会导致标本的表面还没有冷冻,而贴近速冻台的一面温度已经太冷。在不影响实验结果的前提下,标本取材尽量小一些,控制在1.5cmx15cmx0.3cm,厚度不超过4mm,这样有利于组织的快速冻结,并将组织块尽快移到冷冻头上骤冷,以缩短冷冻时间。
预冷
✔提前开机做好预冷
避免由于缓慢冷冻而产生冰品,宜提前开冰切机做好预冷。将冰冻切片机的温度降至-20℃~-25℃。一般将冷冻箱温度降至-25℃℃,冷冻头温度降至-30℃。
✔保持刀具与台面的干燥
取材时尽量保持刀具与台面的干燥,避免组织与水接触,如送检组织内含水或血性液体,应用干的纱布或滤纸把水分吸干后再行冷冻。
OCT包埋和速冻
✔单独OCT包埋剂包埋和速冻
样品托放上速冻台,加入少量OCT包埋剂,待底部变白但表面未凝固时放上组织样本,适当加盖少量包埋剂,加冷冻锤速冻组织(注意保持组织冷冻切面的水平)。这样既可以提高冷冻速度,又可以避免接触空气后产生干、湿影响。
切片
✔冰冻切片厚度适中
冰冻切片不能太薄,一般≧6um,6um的片子可以有更多的空间避免风干假象,也会减少冰晶所造成的细胞核空洞。
总之,掌握“三度”是解决冰晶问题的关键,即湿度、温度、速度。
参考文献:
毛成毅,杜娟,肖华亮,李增鹏.不同组织冰冻切片体会. 2017.
(来源:微信公众号:病理海)